常规PCR法:是根据支原体核糖体16s-23s rRNA的特异保守序列设计引物,对待检样本DNA进行扩增,通过对扩增产物的大小分析作出诊断。用于【细胞培养中支原体】污染的检测。本文缔一生物为您做一下分享。
优点:①灵敏度高,特异性好。②时间短,2-3小时出结果。③符合欧洲药典。④操作简单。
缺点:①对于已做支原体灭活处理的样品,由于支原体DNA仍旧存在其中,PCR结果会出现假阳性。(可用培养法做补充验证)。②不同厂家生产的试剂盒质量差异巨大(由于引物及内在设计不同),需谨慎选择,尽量在专业人员推荐指导下使用。
『支原体常规PCR检测试剂盒』介绍
德国MB公司生产的支原体常规PCR检测试剂盒,依据操作步骤的细微差别,分一步法和经典法两类。此两类试剂盒较其他厂家同类产品,具有以下*的优点:
①高特异性,270bp左右的一条阳性对照条带,涵盖了所有可能感染细胞的支原体物种,操作简单,结果易于观察。(使用MB的试剂盒,下表列出的支原体物种均为阳性,其他微生物或真核细胞均为阴性。根据16s rRNA序列的同源性比对,该试剂盒可检测出1种脲原体、7种无胆甾原体和85种支原体。)
②高灵敏度,1-5拷贝/μl的支原体DNA即可检出。
③试剂盒含内控对照,可防止假阴性的发生。
④符合欧洲药典要求。
适用范围
A. 科研用户,细胞上清的筛查可选用MB公司生产的支原体常规PCR检测试剂盒(一步法)。(详见下文)
【Venor® Gem OneStep (货号:11-8050)】或【Venor® Gem Advance (货号: 11-7096)】
B. 对于需遵循药典要求的生物制药企业,可选用MB公司生产的支原体常规PCR检测试剂盒(经典法)。
【Venor® Gem Classic(货号: 11-1050) 】+ Taq酶 (货号: 53-1050)】